天然的CRISPR-Cas9系统由三部分组成： SpCas9 (以下简称Cas9)、 crRNA 、 tracrRNA 。其中，crRNA和tracrRNA通过局部碱基配对组成gRNA(guide RNA)，gRNA与Cas9蛋白结合后引导Cas9蛋白识别和切割目标DNA序列 (图1)。

2019年10月12日 · CRISPR-Cas9 是一种细菌获得性免疫，用于降解入侵的外源 DNA。CRISPR RNA (crRNA) 与转录激活 crRNA (Trans-activating crRNA， tracrRNA) 退火形成的复合物能特异性识别与其互补的基因组序列，引导 Cas9 核酸内切酶在目的片段生成 DNA 双链断裂，如下图所示。

2021年12月26日 · CRISPR/Cas9是第二类中依赖gRNA引导单一具有内切核酸酶活心的 cas9蛋白 形成复合物（sgRNA的3’端是具有结合cas9蛋白的双链RNA结构，负责招募cas9到靶向区域），实现对核酸DNA效应，依赖细胞中自身的 同源重组 （HDR）或者 非同源末端连接 （NHEJ）的途 …

天然的CRISPR-Cas9系统由三部分组成：SpCas9 (简称Cas9)、crRNA、tracrRNA。 tracrRNA（在CRISPR-Cas9编辑技术中被优化并命名为gRNA scaffold），它负责与Cas9结合，与重复序列具有同源性。

2024年8月13日 · Cas9蛋白结合sgRNA通过20nt长的向导RNA（蓝色）与人EMX1基因DNA结合；红色部分是sgRNA的骨架；粉色标记的是PAM序列，此处为TGG；Cas9会在PAM序列的上游约3bp出会产生一个双链断裂（DSB），图中红色箭头指示DSB断裂处。

CRISPR-Cas9 是一种细菌获得性免疫，用于降解入侵的外源 DNA。CRISPR RNA (crRNA) 与转录激活 crRNA (Trans-activating crRNA， tracrRNA)退火形成的复合物能特异性识别与其互补的基因组序列，引导 Cas9 核酸内切酶 在目的片段生成 DNA 双链断裂。 （图1 CRISPR-Cas9系统示意图）

The targeted genome cleavage is achieved by targeting sequence-specific cleavage of S. pyogenes Cas9 endonuclease with a gRNA. In order for the gRNA to successfully direct Cas9 cleavage, the corresponding target DNA sequence in the genome must be found next to a PAM site, also known as a Protospacer Adjacent Motif.

2018年2月16日 · CRISPR Cas9系统只需设计一个包含20个碱基对的RNA寡核苷酸，即可靶向任何基因组位点。 gRNA是CRISPR Cas9系统的重要组成部分，在设计gRNA序列时需要考虑诸多因素。 在细菌和古细菌中，CRISPR RNA（crRNA）和反式激活CRISPR RNA（tracrRNA）形成一个复合体，作为引导Cas9核酸酶降解外来遗传物质的引导装置。 我们将tracrRNA和crRNA结合成一个单一的合成的gRNA，这个单组分系统不仅简化了实验设计，而且还产生了相同或更高的导 …

2025年3月27日 · Design of guide RNA (gRNA) with high efficiency and specificity is vital for successful application of the CRISPR gene editing technology. Although many machine learning (ML) and deep learning (DL)-based tools have been developed to predict gRNA activities, a systematic and unbiased evaluation of their predictive performance is still needed. Here, we provide a brief overview of in silico tools ...

通过本文，您将了解到如何设计高效的gRNA序列，掌握CRISPR-Cas9系统的原理与操作步骤，并学会如何进行单克隆筛选，确保实验结果的准确性和可靠性。 无论您是初学者还是有一定经验的研究人员，本文都将为您提供全面的指导，帮助您成功应用CRISPR-Cas9技术进行 ...