2023年10月12日 · IB：即指 免疫印迹 （immunoblotting）或 western blot （WB），用来检测目的蛋白的存在与否，例如图中“IB: Flag”是指用Flag抗体做WB检测，看样本中是否存在Flag标记的蛋白，IB：Myc的含义同理；值得注意的是，抗体应使用兼容IP实验的。

IB全称是immunoblotting，即 免疫印迹，也就是常规的 Western Blotting，用于显示目的蛋白。 WCL全称是whole cell lysates，即整个细胞的裂解成分。 HC全称是heavy chain，即重链， LC全称是light chain，即轻链。 现在将图分为三部分，先看第一部分，即上面的部分，“+”表示含有这种蛋白，“-”表示没有，这个实验一共做了四组，从左到右分别为： （1）只表达HA-cGAS的 293T细胞； （2）共同表达HA-cGAS与NRLP14-FL的293T细胞； （3）只表达 STING -HA的293T …

2022年4月23日 · Co-IP（co-Immunoprecipitation），免疫共沉淀： co-IP 是一种常用的鉴定蛋白-蛋白相互作用的方法，其基本实验流程和IP类似，通过使用诱饵蛋白（IP 中的抗原，bait protein）特异性抗体间接捕获与其结合的靶蛋白（prey protein）。

完整抗体=2条重链（~55KD/重链）+2条轻链（~25KD/轻链），抗体变性后，就会产生一个55KD的重链蛋白，1个25KD的轻链蛋白，WB检测IP的样本时，由于二抗也识别结合一抗的轻重链，导致WB曝光时会产生对应的55KD与25KD分子量的条带。

2024年1月9日 · 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）基于抗体和抗原之间的特异性/专一性作用用于研究蛋白质相互作用的金标准（gold standard）。 相较于pull down、酵母双杂交等研究蛋白互作的方法，其特色之一便是捕获的蛋白互作发生在所研究的特定组织细胞内，保留了互作蛋白及复合体（complexes）的“内源”状态，但这些要能够达到 IP级别抗体。 Co-IP实验基本过程包含四步：1、 非变性蛋白 提取物中添加抗体（IP级别抗体）；2、目标蛋白被抗体免疫特 …

免疫沉淀 (IP) 和免疫共沉淀 (Co-IP) 是利用固定在固相支持物上的抗体,从复杂的混合物中,富集或纯化特定蛋白质或蛋白质组的方法。 IP是许多蛋白质组工作流程中的重要步骤,用于研究蛋白质的存在、分子量大小、相对丰度、丰度的上调或下调、蛋白稳定性、翻译后修饰及相互作用等。 利用IP获得的纯化抗原可采用多种技术进行分析,如 ELISA 和 Western Blotting等。 分离所得的蛋白还可以在酶切后,通过质谱进行鉴定或定量分析。 最早的免疫沉淀方法,是将放射性前体 ( 如氨基 …

2023年7月6日 · Co-IP组：用来证明研究的2个蛋白是否存在互作。 第一张胶图表示在anti-FLAG沉淀FLAG-ChREBP蛋白的基础上进行IB检测验证Myc-HDAC1蛋白是否存在。

免疫沉淀 （Immunoprecipitation， IP） 是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。 抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后，再用 ProteinA/G抗体 -目的蛋白复合物从混合液中沉淀下来，最后将靶蛋白从磁珠上洗脱，并通过SDS-PAGE， Western Blot 等手段 ...

Protein complexes isolated by co-IP can be further investigated by western blot (WB), mass spectrometry (MS), and functional assessments to confirm hypothesized binding partners or identify new interacting proteins. This guide aims to provide an overview of co-IP experimental design, important controls, protocols, and troubleshooting.

洗脱复合物后，通过**Western Blot（WB）**检测是否有其他蛋白与“诱饵”共沉淀，从而确认相互作用。 Co-IP验证的蛋白间相互作用 可以是直接或间接的 （如通过中间蛋白桥接）。 实验成功的关键在于 抗体的高特异性和亲和力。 1. 样本制备：细胞裂解液是基础. 裂解缓冲液配方：常用RIPA缓冲液（含Triton X-100或NP-40），需添加蛋白酶抑制剂（如PMSF）防止蛋白降解。 裂解条件：冰上操作，避免高温导致蛋白变性。 2. 预清除：降低背景噪音. 加入无关抗体或空白磁 …